RNA甲基化研究的完整解决方案

通过EpiGentek的全套RNA甲基化产品扩展您对RNA的理解

什么是RNA甲基化？

RNA甲基化是对RNA进行的一种转录后修饰，其影响基因调控而不改变结构遗传序列。它在包括病毒在内的许多生物物种中被识别，并与重要的生物过程密切相关。像DNA甲基化一样，RNA甲基化是可逆的，在生命中大量存在，主要涉及甲基的添加。然而，它在不同类型的RNA中的分布并不均匀。RNA甲基化发生在tRNA、rRNA、mRNA、tmRNA、snRNA、snoRNA、miRNA和病毒RNA中。mRNA的两种更熟悉的修饰包括N6-甲基腺苷（m6 A）和5-甲基胞嘧啶（5 mC）。

在所有化学上不同的RNA修饰中，N6-甲基腺苷（m6 A）是最常见的。它涉及腺苷碱基在氮-6位的甲基化。通常被称为“第五个RNA碱基”，m6 A占真核生物中所有RNA甲基化的80%以上。特别地，由于m6 A在3 ‘UTR处的富集，这种RNA修饰被认为对于mRNA调节是重要的。它也与各种类型的癌症有关，包括白血病，乳腺癌和前列腺癌。

在各种RNA分子中发现的另一个丰富的表观遗传标记是5-甲基胞嘧啶（5 mC），它涉及在5-碳环上添加甲基。据报道，它存在于几种不同的RNA种类中，包括rRNA、tRNA、eRNA以及mRNA和各种非编码RNA。在单个点检测RNA中5 mC修饰的理想方法是通过亚硫酸氢盐转化，然后进行高通量测序。

哪种RNA甲基化工具适合您的实验？

RNA修饰，特别是RNA甲基化的重要性是显而易见的。然而，研究RNA甲基化的领域仅处于起步阶段。许多已建立的检测方法严重依赖于抗体依赖性全转录组技术，其中大多数都集中在RNA中m6A的出现，因为它具有众所周知的生物学作用。5mC RNA检测技术，包括亚硫酸氢盐测序，也引起了人们的兴趣，因为5mC RNA与多种细胞过程和肿瘤发生有关。新的生物化学方法与高通量测序相结合，使得研究整个转录组以及绘制个体修饰成为可能，揭示了RNA修饰酶或蛋白质结合因子的真正功能。

在你开始你的RNA甲基化研究项目之前，我们建议你先回顾一下与你的实验相关的文献。如果其他研究人员也做了类似的工作，你应该利用他们的信息，并将其作为你研究的基础，确保仔细审查任何潜在的障碍。

如果您希望分析RNA中m6 A或5 mC修饰的总体水平，我们建议从样品中甲基化状态的简单预筛选开始。 这些方法可用于我们流行 的m6 A RNA甲基化定量试剂盒和 5-mC RNA甲基化ELISA试剂盒。 对于直接靶向m6 A或5 mC，我们建议使用我们的 m6 A富集试剂盒 或 亚硫酸氢盐转化试剂盒。

RNA甲基化研究步骤详情

RNA分离

分离RNA是任何RNA甲基化研究的关键第一步。我们的RNA制备试剂盒可直接从组织、培养细胞和无细胞液体标本（特别是唾液和鼻咽拭子）等样本中快速有效地分离总RNA。纯化的RNA可用于各种常规应用，如RT-PCR、cDNA合成、北方印迹、差异显示、引物延伸和mRNA选择。

总体m6A 5mC RNA定量

EpiGentek的m6 A和5 mC RNA甲基化试剂盒使研究人员能够轻松确定RNA甲基化如何影响他们的研究项目。我们的试剂盒允许直接定量N6-甲基腺苷（m6 A）或使用从任何物种（包括哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒）分离的总RNA测量全局5-mC RNA。

RNA亚硫酸氢盐转化cDNA合成

亚硫酸氢盐处理技术，也称为亚硫酸氢盐转化，是制备用于位点特异性甲基化分析的RNA的最理想方法。该过程将胞嘧啶转化为尿嘧啶，留下甲基化胞嘧啶完整，然后通过高通量测序容易区分。亚硫酸氢盐转化的RNA也可用于产生cDNA，用于各种下游应用以分析甲基化条件。

NGS文库制备

文库制备是下一代测序（NGS）的关键步骤。我们为NGS提供了许多廉价的解决方案，包括从困难的样品中方便地构建高质量RNA/ DNA文库的试剂盒，这些样品可用于各种基于Illumina的平台。

MeRIP m6 A-Seq测定

使用我们的CUT RUN RNA m6 A富集试剂盒获得m6 A RNA的高分辨率图谱。通过独特的核酸切割酶混合物，这些试剂盒仅分离抗体结合位置处的RNA片段，并同时切割/去除刚好在靶区域下方的RNA序列片段。我们的两种试剂盒都可以从低输入RNA中富集含有m6 A修饰的RNA片段，具有最小的非特异性背景水平。CUT RUN RNA m6 A-Seq试剂盒包括文库制备步骤作为额外的好处。

研究RNA甲基化的抗体

N6-甲基腺苷（m6 A）是真核生物中RNA分子中最常见和最丰富的修饰之一。m6 A的化学性质使其难以区分;因此，分析这种修饰的方法高度依赖于所用抗m6 A抗体的质量。我们的多克隆和单克隆m6 A抗体都可以可靠地用于RNA中m6 A的特异性检测。它们已经过全面测试，并保证在各自的应用程序中工作。