简化染色质研究工作流程,以说明示例研究的进展情况以及支持这些步骤的EpiGentek试剂盒

什么是染色质免疫沉淀(ChIP)?

研究染色质相关修饰的最广泛使用的方法之一是染色质免疫沉淀(ChIP),这是一种感兴趣的蛋白质与特定基因组DNA区域结合的过程。这种流行的ChIP检测为表观遗传学研究人员提供了有关某些蛋白质或蛋白质修饰与特定DNA序列之间相互作用的宝贵信息。

蛋白质-DNA相互作用对某些细胞功能如DNA复制和重组、基因转录、染色体分离、信号转导和表观遗传沉默至关重要。例如,了解蛋白质-DNA相互作用可以用于比较两个不同组(如患病或健康组织)中与特定基因启动子区域相关的组蛋白甲基化的量。染色质免疫沉淀方法也可用于绘制各种其他组蛋白修饰的基因组位置。

ChIP适合您的实验吗?

由于染色质免疫沉淀和各种下游应用可能需要时间并伴随着相关费用,因此值得了解ChIP是否适合您的研究。

在开始之前,我们建议您先回顾一下与您所提议的实验相关的现有文献。有些时候,其他研究人员已经完成了跑腿的工作,这给了你一个坚实的基础,你可以开始研究,而不必重新发明轮子。从这里开始,你的团队可以采取各种变化和独特的角度,使研究变得有趣,独特和有价值,同时回顾以前完成的工作,发现以前的研究人员面临的任何潜在障碍或问题。让别人的经验对你有利,这样你就可以提前保存自己学习的时间和头痛。

最后,研究人员可能已经对您的目标进行了ChIP,因此可以保存大量宝贵的时间和精力。可以找到此类信息的一些最常见的资源包括USCS基因组浏览器,ENCODE项目和NCBI。一定要检查这些资源的信息之前,进行您的研究,看看工作是否已经完成。如果没有,并且您的目标尚未阐明,那么进行ChIP实验可能是您研究的正确解决方案。

1、染色质分离

染色质是DNA和蛋白质的组合,将DNA包装成较小的体积以适应细胞,有助于防止DNA损伤,并控制基因表达和DNA复制。染色质样品的适当分离是研究蛋白质-DNA相互作用的测定中的重要因素。EpiGentek的专有染色质分离试剂盒确保使用各种方法从哺乳动物或植物细胞和组织中提取染色质,以确保完整染色质的高质量分离。

目录号
名称
描述
P-2001
ChromaFlash染色质提取试剂盒
用于从哺乳动物细胞或组织中分离完整的染色质
P-2022
ChromaFlash植物染色质提取试剂盒
用于从植物细胞或组织中分离完整的染色质
P-2023
ChromaFlash染色质分离剪切套件
用于以简单快速的方式从哺乳动物细胞或组织中分离染色质或DNA-蛋白质复合物,然后通过超声处理进行剪切步骤

 

2、染色质可及性

染色质结构是基因调控的一个重要决定因素,其中一个主要因素是染色质对转录因子和其他DNA结合蛋白的可及性。一般来说,染色质越浓缩,转录因子和其他DNA结合蛋白就越难接近DNA并执行其任务。DNA越容易接近,周围的基因就越有可能被活跃地转录。研究染色质结构的可及性对于提供核小体存在或不存在的信息特别感兴趣,核小体直接或间接影响一系列其他细胞和代谢过程。

目录号
名称
描述
P-1047
EpiQuik染色质可及性检测试剂盒
用于染色质定量分析和常染色质或异染色质状态的测定

 

3、染色质断裂

染色质样品的超声能量处理是酶消化方法的广泛接受的替代方法。通过在我们的超声技术中强调更高的通量处理和防止样品污染,我们的EpiSonic™超声仪可以轻松集成到现有的实验室工作流程中,并且特别适合与表观遗传和下一代应用兼容。

目录号
名称
描述
EQC-2000
EpiSonic 2000超声处理系统
用于下一代测序应用中的DNA和染色质的多样本剪切

 

4、染色质免疫沉淀(ChIP)

由于蛋白质-DNA相互作用在细胞功能中起着至关重要的作用,因此识别DNA结合蛋白的遗传靶标并了解蛋白质-DNA相互作用的机制对于理解细胞过程至关重要。研究人员研究这些相互作用的工具之一是染色质免疫沉淀或ChIP。与其他方法相比,ChIP的优势在于该过程允许检测与活细胞中基因的特定序列结合的特定蛋白质。EpiGentek提供一系列检测试剂盒解决方案,帮助您的实验室高效、准确、重复地进行成功的ChIP实验。

目录号
名称
描述
P-2002
EpiQuik染色质免疫沉淀(ChIP)试剂盒
用于通过微孔板形式特异性免疫沉淀细胞输入样品中的染色质
P-2027
ChromaFlash高灵敏度ChIP套件
用于从少量哺乳动物细胞或组织中免疫沉淀染色质(ChIP)
P-2014
EpiQuik Plant ChIP Kit
用于特异性免疫沉淀来自植物输入样品的染色质

5、PCR /测序(ChIP-Seq)NGS分析

NGS(下一代测序)技术进一步提高了数据输出量,降低了ChIP测序的成本。ChIP-Seq提供了已经讨论过的染色质免疫沉淀过程与下一代测序方法的组合,为鉴定转录因子和其他蛋白质的全基因组DNA结合位点提供了有效的方法。ChIP-Seq提供了在全基因组水平上解析靶蛋白结合位点的特定遗传序列的益处。实时定量PCR(RT-qPCR)通过使用特异性引物的选择性扩增来分析修饰的组蛋白和/或其他DNA结合蛋白在精确基因座处的结合位点,提供了一种替代方法。 EpiGentek为这两种PCR NGS提供了各种廉价的解决方案,包括全套试剂盒,可以从少量或困难的样品中方便地构建高质量的DNA文库。

目录号
名称
描述
P-2030
EpiNext ChIP-Seq高灵敏度试剂盒(Illumina)
用于从低输入细胞制备简化的ChIP测序NGS文库
P-1029
EpiQuik定量PCR快速试剂盒
用于ChIP的定量真实的时间聚合酶链反应(PCR)分析

6、切割运行/切割标签

近年来,研究人员通过一种称为CUT RUN的过程进行DNA-蛋白质相互作用分析的方式发生了革命性的变化。代表使用核酸酶的靶下释放切割,该过程被开发用于从有限的生物材料中释放捕获的靶蛋白/DNA复合物,用于绘制蛋白质-DNA相互作用,并且显著提高了绘制分辨率。这一过程允许使用较少的输入材料,同时限制背景信号。作为扩展,cTIP(CUT Tag In Place)增加了为下一代测序准备文库的步骤,并提供了与ChIP-Seq类似的解决方案,具有前面提到的所有优点。随着研究领域的变化,CUT RUN和cTIP有望成为越来越受欢迎的DNA-蛋白质相互作用研究方法,因为它们具有广泛的优势。

目录号
名称
描述
P-2028
EpiNext CUT RUN快速套件
用于富集具有来自低输入细胞/染色质的蛋白质的特异性DNA复合物,通过NGS鉴定或绘制体内蛋白质-DNA相互作用
P-2032
EpiNext cTIP(CUT Tag In-Place)-测序试剂盒
用于从低输入细胞/染色质中富集蛋白特异性DNA复合物,并使用Illumina平台制备NGS文库

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